Энциклопедия
Библиотека
Карта сайта
Ссылки




Пользовательского поиска





предыдущая главасодержаниеследующая глава

ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Паразитологическому исследованию необходимо подвергать живых или свежеуснувших рыб всех возрастных категорий.

Рыб вскрывают по методу, разработанному К. И. Скрябиным и модифицированному применительно к рыбам В. А. Догелем и Э. М. Ляйманом. (Техника вскрытия рыбы описана в разделе «Микробиологические методы исследования».)

Органы и ткани рыб исследуют в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость, печень, мочевой пузырь, половые органы, кишечник, мышцы, головной и спинной мозг.

Результаты исследования вносят в рабочий журнал, где указывают дату исследования, пол, возраст, длину рыбы, результаты паразитологического исследования с предварительным и окончательным определением вида паразитов.

Внешний покров. При наружном осмотре кожного покрова и плавников собирают, предварительно определяют и фиксируют для последующего изучения всех паразитов, видимых простым глазом (паразитические ракообразные, пиявки и др.). После этого приступают к микроскопии мазков из соскобов со всей поверхности тела или из нескольких участков (крупные рыбы). Скальпелем соскабливают слизь с кожного покрова и плавников, помещают ее на предметное стекло и смешивают с ранее нанесенными туда же 2-3 каплями прокипяченной и остуженной воды. Накрывают покровным стеклом и рассматривают сначала под лупой, а потом при малом увеличении микроскопа. Исследование рыб на возбудителя костиоза ведут при среднем и большом увеличении микроскопа. Кроме возбудителя костиоза, на коже рыб паразитируют другие жгутиконосцы, а также инфузории, моногенетические сосальщики, паразитические рачки. Весьма часто на них можно обнаружить споровиков, локализующихся в дермальных бугорках.

Крупных паразитов (рачков, гельминтов) подсчитывают в абсолютных числах, а мелких (споровиков, инфузорий и других простейших) - в относительных, то есть подсчитывают число паразитов в десяти полях зрения микроскопа и определяют средние показатели. При этом высчитывают по каждому паразиту в отдельности экстенсивность и интенсивность инвазии для каждого вида и возраста рыб.

В случае затруднения видового определения тех или иных паразитов их необходимо консервировать в соответствующих жидкостях и сохранять для дальнейшей камеральной обработки. На склянку обязательно наклеивают этикетку.

Жабры. Все жаберные дуги вынимают, помещают на предметное стекло, собирают всех видимых паразитов, их подсчитывают и фиксируют.

Соскоб с жаберных лепестков или целые жаберные дуги с несколькими каплями воды зажимают между двумя предметными стеклами так, чтобы они стали прозрачными, и исследуют при малом увеличении микроскопа.

Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут находиться не на поверхности жаберных лепестков, а в особых соединительнотканных образованиях (бугорках); обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка при помощи препаровальных игл. В кровеносных сосудах жабр могут находиться яйца сангвиникол, споры и мицелии гриба.

Глаза. Для обнаружения паразитов глаза извлекают из глазных впадин, помещают на предметное стекло и вскрывают острыми ножницами с внутренней каудальной стороны. Извлеченное стекловидное тело, хрусталик и содержимое передней камеры глаза компрессируют между двумя предметными стеклами и просматривают при малом увеличении микроскопа. В глазах можно обнаружить личинки сосальщиков рода Diplostomulnm.

Кровь. Каплю крови наносят на обезжиренное предметное стекло, вносят для предотвращения свертывания немного 1%-ного раствора лимоннокислого натрия, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Для предотвращения высыхания крови края покровного стекла обмазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому - Гимза или гематоксилином и также исследуют под микроскопом.

Брюшная полость. Брюшную полость вскрывают по методике, изложенной в разделе «Микробиологические методы исследования», с той только разницей, что при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать условия стерильности. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника начинают от анального отверстия, вводя непосредственно в него тупой конец одной из брани ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки исследуют под микроскопом.

Сердце. Для исследования сердце помещают в бактериологическую чашку с физиологическим раствором, вскрывают его полости, промывают и образовавшийся осадок исследуют под микроскопом на наличие возбудителя сангвиниколеза.

Печень. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих в печени, ее делят на небольшие кусочки, которые компрессируют и исследуют под лупой и затем при слабом увеличении микроскопа.

Желчный пузырь. Для обнаружения паразитов желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой и микроскопом. В желчном пузыре можно обнаружить простейших и сосальщиков.

Селезенка. Селезенку помещают между двумя стеклами, сжимают до прозрачности и исследуют под микроскопом.

Почки. Для обнаружения паразитов почки компрессируют и исследуют под микроскопом. В почках можно найти споровиков и яйца сосальщиков.

Плавательный пузырь. В случае необходимости соскоб с внутренней оболочки плавательного пузыря можно исследовать под микроскопом компрессорным методом.

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре можно обнаружить сосальщиков, споровиков и инфузорий.

Половые органы. Для обнаружения паразитов железу по частям компрессируют между стеклами и просматривают под микроскопом.

В половых органах встречаются микроспоридии.

Желудочно-кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира и печени, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. По ходу вскрытия обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) извлекают и помещают в физиологический раствор. Содержимое из различных отделов желудочно-кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов (октомитус).

Мышцы. Чтобы обнаружить мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела и исследуют компрессорным методом под лупой и под микроскопом при малом увеличении. В мышцах можно обнаружить споровика плистофору и его споры.

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков.

Методы окраски.Мазки крови на наличие кровепаразитов окрашивают азур-эозином по Романовскому - Гимза (0,8 г азура II, 3 г эозина, 250 мл химически чистого глицерина и 250 мл метилового спирта) или метиленовой синью по Машковскому (1 г метиленовой сини и 2,5 г буры растворяют в 100 мл горячей воды).

Готовую, имеющуюся в продаже краску Романовского перед окрашиванием разводят из расчета 2 - 3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Если готовая краска отсутствует, ее можно приготовить самим. Для этой цели 1 г азура II растворяют в 1 л прокипяченной дистиллированной воды (раствор № 1) и 1 г эозина - в 1 л воды (раствор № 2). Оба раствора хранят отдельно. Перед употреблением на 1 мл нейтральной дистиллированной воды прибавляют по две капли каждого раствора. Продолжительность окраски 20 - 40 минут. Эритроциты окрашиваются в красный или розовый цвет, протоплазма паразитов и лейкоцитов - в синий, ядра паразитов - в красный, а лейкоцитов - в фиолетовый.

Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки в течение 30 секунд, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5 - 10%-ным водным раствором танина. Эритроциты получаются красновато-фиолетовые, протоплазма простейших кровепаразитов - ярко-голубая, ядра лейкоцитов фиолетовые.

Для изучения морфологии паразитических инфузорий применяют окраску железным гематоксилином по Гейденгайну (протрава 2 - 2,5%-ным раствором сернокислых железо-аммиачных квасцов - 1 - 2 часа, окраска их 1%-ным спиртовым раствором гематоксилина в течение нескольких часов и дифференциация 1%-ным раствором 5-10 минут). Окрашивать инфузории можно также гематоксилином Делафильда или квасцовым кармином.

Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематокслином или по Романовскому - Гимза.

Слизистых споровиков окрашивают 1%-ным водным раствором метиленовой сини 30-60 минут, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96°-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.

Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде, затем помещают в краску (от 1 минуты до нескольких часов в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать, исследуя препараты под микроскопом. Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут тщательно промывают от краски. Отмытых от краски паразитов осторожно сушат фильтровальной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96°-ный), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют гвоздичным маслом и ксилолом.

Цестод, так же как и трематод, можно окрашивать гематеи-ном Майера (1 г гематеина растворяют в 1 л дистиллированной воды с последующим добавлением 0,2 г йодноватокислого натрия и 50 г калийных квасцов). Гематеин допускает как прогрессивное, так и регрессивное окрашивание (без дифференцировки или с ней). При прогрессивном способе красят только 30 минут, при регрессивном - в течение 24 часов. Во втором случае для дифференциации препарат обрабатывают в 1%-ном солянокислом спирте под контролем микроскопа с последующим тщательным отмыванием краски в проточной воде в течение 20 - 30 минут.

Хорошие результаты получают при окраске мелких цестод молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят вдвое дистиллированной водой, добавляют в нее небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски) и жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают в течение 20 - 60 минут водопроводной водой и помещают в бальзам.

Для окраски крупных цестод этот способ модифицирован. Цестод в течение суток промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре. Затем гельминтов помещают на 4 - 6 часов в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30%-ной молочной кислоты), контролируя интенсивность перекрашивания под микроскопом, после чего на сутки их переносят в дистиллированную воду с добавлением в нее трех капель раствора сернокислого железа и двух капель 1%-ного раствора карболовой кислоты. В дальнейшем цестод переносят на чистое большое стекло, расправляют на нем и высушивают при температуре 30 - 37° (не выше, иначе препарат сморщится). Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта.

Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой они хранятся. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином.

Идентификацию паразитов производят по «Определителю паразитов пресноводных рыб СССР» (издательство АН СССР, 1962) или по схеме, приведенной в руководстве Э. М. Ляймана «Болезни рыб» (Сельхозиздат, 1963).

предыдущая главасодержаниеследующая глава



заказывал сайт у ребят http://unicontent-studio.ru


© Алексей Злыгостев, подборка материалов, разработка ПО 2001–2017
Разрешается копировать материалы проекта (но не более 20 страниц) с указанием источника:
http://fish.geoman.ru "Иллюстрированная энциклопедия рыб"

Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru